原位雜交實驗

簡要描述：原位雜交實驗（in situ hybridization）將標(biāo)記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交。用原位雜交技術(shù)，可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性，可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調(diào)節(jié)機制。已成為當(dāng)今細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

更新時間：2022-12-22
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原位雜交實驗步驟：前期胚胎的制備。

原位雜交**天進行重新水化和固定、預(yù)雜交、雜交。

原位雜交第二天進行 1 將探針回收，放于－20C保存（通常探針可重復(fù)使用十次左右）2加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。3置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。4置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。5用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動。6室溫下加1ml 1：2：7溶液，時間為一小時。 7 按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連**抗體，4C 冰箱過夜。

原位雜交第三天進行1）用1ml含10%熱滅**清的MABT溶液置換抗體溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。2）用1ml 1mM米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate（底物，用之前加5mM米唑），十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色5）將顯色的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定，拍照。6）4C冰箱保存。

原位雜交實驗服務(wù)內(nèi)容：①細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位，可用于基因圖譜，基因表達和基因組進化的研究；

②感染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、巨細胞病毒DNA的檢測；

③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測；

④基因在染色體上的定位；

⑤檢測染色體的變化，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等；

⑥分裂間期細胞遺傳學(xué)的研究，如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定，某些腫瘤的診斷和生物學(xué)劑量測定等。

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