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新生小鼠原代心肌成纖維細胞的分離與培養

更新時間:2024-03-28      點擊次數:1547

1. 準備0-1天內的C57BL/6J鼠新生鼠。

2. 用溫的無菌去離子水,輕輕擦拭每只新生鼠。

3. 70%的乙醇去除新生鼠身體上的污染物。

4. 斷頭,取心臟,心臟置于冰的PBSG溶液中。

5. 除去血液和非心臟組織。

6. 剪碎心臟組織。

7. 加入胰酶-膠原酶消化液,每只新生鼠75ul

8. 37°C的搖床培養箱中,以250 rpm/ 5 min,消化心肌組織

9. 輕輕渦旋,然后離心10秒,丟棄第一次消化的上清液。

10. 開始第二次消化,250 rpm/ 5 min輕輕渦旋,然后離心10秒,收集上清液到2倍體積的胎牛血清中。

11. 重復上述消化過程,共進行8次消化,收集細胞懸液。

12. 使用沒有包被的10cm大皿,預種植細胞1h

13. 1小時后,將培養皿從培養箱中取出,移除沒貼壁的細胞上清液,加入完丨全培養基繼續培養。


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